血液中乙醇含量的测定——顶空气相色谱法

四年一度的足球盛宴如火如荼，熬夜提神举杯欢呼欢庆胜利总离不打开酒，酒亦可阻挡连续降温的风寒，但千万别忘了喝酒不开车，开车别喝酒。不过据报道，在国内，特别是将近年关，每年有将近10万人被车祸夺去宝贵的生命，其中60％的车祸都是由于酒后驾车引起的。

自2011年5月1日醉驾入刑以来，人们越来越重视酒后驾驶行为。此外，酒类饮料的主要成分是乙醇，大量饮用高浓度酒可能会造成酒精中毒甚至是死亡，过量饮酒同时也会使行为异常，从而发生意外甚至犯罪，比如酒后闹事、醉酒死亡等。因此，在发生某些自杀、凶杀的案件时，执法部门也要首先确定是否有酒精作用因素，所以从这方面来看，测定血液中乙醇的含量也有着至关重大的意义。

仪器和耗材

1、仪器

GC-2030气相色谱仪（带氢火焰离子化检测器），分流/不分流毛细管进样口

AHS-32型全自动顶空进样器

专用毛细管色谱柱PEG-20M：30m×0.32mm×0.5um

气源：RYH-300氢气发生器，RYA-2000空气发生器，RYN-300氮气发生器

N2000色谱工作站

电脑、打印机

2 、试剂

乙醇、叔丁醇均为色谱纯试剂，血液中乙醇标准样品，样品提取与前处理

1） 样品前处理

本次方法验证参考GA/T842—2019《血液酒精含量的检验方法》的要求。分别移取100μL血液中乙醇样品，加入20mL顶空瓶中，然后加入500μL叔丁醇内标工作液，作顶空进样分析。将顶空瓶及装有血液中乙醇标准样品的采血管放入AP 500样品架中，使用AP 500全自动样品处理工作站，由工作站全自动完成采血管的抓取与转移，采血管信息的扫码录入，血样混匀，采血管开盖与关盖，血液样品的抽取与准确分推，顶空瓶的抓取与转移，顶空瓶的开盖与钳盖密封，顶空瓶内样品添加与稀释操作。

2） 标准曲线绘制

分别移取100μL系列浓度乙醇标准溶液(5、10、20、50、80、200、300 mg/100 mL)，加入20 mL顶空瓶中，然后均加入500 μL叔丁醇内标工作液，每个浓度点的标准溶液独立重复测定2次。

3） 样品分析

气相色谱条件

色谱条件：柱温：50℃；检测器：火焰离子化检测器；检测器温度：200℃；进样口温度：250℃。顶空自动进样器，顶空炉温：65℃；取样针温度：90℃；传输线温度：110℃；样品瓶加热平衡时间10 min。

回收率与精密度

取同一空白血样，分别添加乙醇标准溶液，使血液中乙醇的质量浓度分别为120mg / 100mL，平行6份，乙醇平均加标回收率为101%，RSD为1.35。

3、结果与讨论

本次方法验证满足GA/T 842—2019《血液酒精含量的检验方法》的要求。AP500全自动样品处理工作站的设计从如何提高样品前处理效率的角度考虑，将样品处理全过程自动化，智能的计算系统帮助实现各种浓度液体的制备，同时设备上集成混匀，扫码等模块，可对顶空瓶进行转移和钳盖密封操作，有效地解决了实验员在血液样品配制过程中耗时长、操作繁琐等问题，更重要的是全过程无需实验员值守，尽可能地减少实验员与血液、高毒性化学品的接触，保障实验员的健康，打造高效安全的实验室。